近年来，H2S的检测方法已被广泛报道。与传统方法相比，荧光法由于其高灵敏度，无渗透性和易于操作成为检测H2S的有力工具[9-14]。到目前为止，在设计H2S的荧光探针时通常使用四种策略，包括还原叠氮化物或亚硝基[15-20]，H2S的亲核加成[21-24]，H2S硫化离开基团 [25-30]，H2S与Cu2 的络合生成CuS [31-33]。各种荧光团已被用于开发荧光探针，其中亚氨基香豆素苯并噻唑(ICBT)荧光团因其的高光稳定性还有高荧光量子产率引起了人们的广泛关注[34]。自第一个基于ICBT支架的探针被Ghosh等人于2011年开发以来[35],各种基于ICBT开发的探针已被开发用于识别包括F—[36]，onoo— [37,38]，Hg2 [39]，CO[40]，生物醇[41],碱性磷酸酶[42],肼[43]，氯磷酸二乙酯[44]，F—和Cu2 [45]在内的不同物种。在我们认知中，只有两个探针被开发来使用ICBT框架识别H2S。在2015年，Sun等人报道了第一种对基于二乙基氨基-ICBT支架的H2S 具有高特异性的荧光探针利用H2S含有还原、消除和环化的诱导串联反应(方案1)[46]。尽管探针对H2S和H2S在活细胞中图像具有良好的传感性能，较短的发射波长仍然是一个明显的缺陷，这也是用ICBT框架构建荧光探针的一个常见问题。众所周知，近红外(NIR)荧光探针由于深度组织穿透、低自荧光背景和对生物样品的光损伤较小而更有利[47-53]。因此，具有近红外发射的H2S荧光探针的发展一直是我们关注的焦点[54]。
在2019年，冯等人报道了基于1，4-二乙基哌嗪修饰的ICBT偏光，利用对亚氨基的保护和去保护策略的H2S近红外荧光探针[55]。此工作为通过嵌入1，4-二乙基哌嗪段实现近红外发射提供了一个很好的思路。然而，这种方法仍然存在一些局限性，如探针的不理想变异性受到亚胺基团反应活性的限制。不利于充分利用NIR结构开发更多的探针来满足多个检测对象的需求。由于大量的反应识别基团可以通过醚化或酯化在酚羟基上开发荧光探针，如烯丙基、叔丁基二甲基硅基，(4-叠氮苯基）亚甲基，2,4-二硝基苯磺酰基，2,4-二硝基苯基，4-（溴甲基）苯硼酸皮纳可酯，二乙基氯磷酸酯等。 如果预先在酚羟基上加入反应识别基团，目标物种引起的串联反应可导致ICBT偏光的产生，该策略将非常有利于ICBT基荧光团的深入利用。
基于这一观点，我们合成了一种新型的非荧光化合物THQ-L，并采用了由HS— 触发两步串联反应（硫解和环化）建立1，4-二乙基哌嗪修饰的ICBT荧光载体(方案1下)，显示出明显的荧光增强。这个探针检测H2S不仅具有荧光开启响应、近红外发射(652nm)、大斯托克斯位移(126nm)和高信噪比（200倍），而且还能有效地检测水中，葡萄酒样品中，以及H2S在活细胞中的可视化的H2S。我们认为通过串联反应构建NIR荧光团的策略更具有普遍性，通过取代保护基团，可以开发出更多不同的NIR荧光探针[56]
2 实验
2.1化合物THQ-2的合成
将化合物THQ-1(234mg，1.0mmol)溶于DMF(20mL)中，加入1-氟-2,4-二硝基苯(186mg，1mmol)，然后加入碳酸钾(207mg，1.5mmol)。 所得混合物在70度搅拌4h，冷却至室温，然后将冷水(50mL)倒入混合物中。将混合物提取，有机层在无水Na2SO4上干燥所。在减压除去溶剂后，原料经柱层析法纯化硅胶基质（石油醚/乙酸乙酯=3/1），使化合物THQ-2成为棕色固体(398mg，74.5%)。1H NMR(400MHz,CDCl3）delta;9.83(s,1H)，8.86(d,J=2.7Hz,1H)，8.28(dd,J=9.3,2.7Hz,1H)，7.04(d,J= 9.3Hz,1H)，6.99(s,1H)，6.14(s,1H)，3.56-3.52(m,2H)，3.43-3.33(m,4H)，3.31-3.27(m,2H)，1.21(t,J=7.1Hz,3H)，1.17(t,J=7.1Hz,3H)。
2.2探针THQ-L的合成
化合物THQ-2(200mg，0.5mmol)、苯并噻唑-2乙腈(88mg，0.5mmol)和哌啶(0.1mL)加入含有乙醇(16mL)和二氯甲烷(4mL)的混合溶剂中。将混合溶液在室温下搅拌4h，然后过滤，得到的固体用柱纯化色谱（石油醚/二氯甲烷1/1)，得到棕红色固体THQ-L(97.3mg，35%)。MP195.0-197.0摄氏度。1H NMR(400MHz,CDCl3）delta;8.86(d,J=2.7Hz,1H)，8.30(dd,J=9.3,2.7Hz,1H)，8.11(s,1H)，7.98(d,J=7.9Hz,1H)，7.80(d,J=7.9Hz,1H)，7.78(s,1H)，7.38-7.29(m,1H)，7.05(d,J=9.3Hz,1H)，6.22(s,1H)，3.57(t,J=7.1Hz,2H)，3.47(q,J=7.1Hz,2H)，3.42-3.31(m,4H),1.30(t,J=7.1Hz,3H)，1.18(t,J=7.1Hz,3H)。 13C NMR(101MHz,CDCl3)delta;164.5，157.0，153.7，147.3，141.3，141.2，138.69，134.4, 133.1, 129.0, 126.5, 125.5, 123.3, 122.1, 121.3, 117.8，117.6, 112.4，107.8, 101.2, 99.9, 47.4, 45.8, 45.7, 44.7, 10.7, 9.9。HRMS(ESI )计算C29H28N6O6S[M CH3OH] = 588.1791；结果：588.4309。lambda;abs：526nm。
frac14;
2.3 THQ-L在红酒样品中的应用程序
来自不同制造商的不同种类的红酒是在锦州（中国)的一家超市购买的）。 将红酒稀释100倍，然后制备用于THF/Wine(3/7，v/v)混合溶剂。 用THF/Wine混合溶剂制备了10mu;MTHQ-L溶液。当不同浓度的NaHS(相当于H2S)加入THQ-L溶液中时，记录THQ-L溶液的荧光信号(652nm2S)。测定的HS—/HSO3—的浓度和回收率用于标准曲线和标准加法计算。
2.4 细胞成像
将培养的MCF-7细胞置于共聚焦培养皿中，然后将10mu;MTHQ-L转移到每个培养皿中，培养30min。随后，THQ-L处理的MCF-7细胞用PBS缓冲液洗涤两次，加入HS—后进一步培养30min（0，10，50和100mu;M）。用PBS溶液洗涤两次后，细胞用于荧光成像。
3 结果和讨论
3.1 探针THQ-L的设计与合成
本工作采用7-羟基四氢喹恶啉-6-甲醛(THQ-1)和2-苯并噻唑乙腈构建D-p-A体系，目的是延长其发射波长[57]。 引入2，4-二硝基苯基(DNP)不仅作为H2S的反应位点，同时，DNP也具有较强的吸电子效应，可通过供体激发的光诱导电子转移（d-PET）过程引起THQ-L荧光猝熄[58]。H2S触发THQ-L的C-O键裂解，随后产生的酚酸盐通过分子内环化攻击alpha;,beta;-不饱和腈基，产生1，4-二乙基哌嗪修饰的ICBT荧光团。荧光团的结构高度共轭，限制了CC双键的旋转，因此荧光团产生强烈的红色荧光信号[55]。所设计的THQ-L很容易通过7-羟基四氢喹啉-6-甲醛与2，4-二硝基苯氟化物的游离酚羟基的醚化反应和随后的克诺维纳格尔与苯并噻唑2-乙腈的缩合反应准备好(方案2)。用NMR和HRMS(ESI.Figs.S1-S4)对THQ-L的结构进行了表征。
3.2THQ-L对H2S的光学响应
为测试THQ-L对H2S的选择性。THQ-L(10mM)的感知能力在PBS(10mM，pH7.4，30%THF)中考察。紫外可见光谱表明THQ-L不能识别H2S(Fig.S5)。随后，荧光实验完成，THQ-L本身本质上是非荧光的，这是由于d-PET过程和通过内
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